INDOOR Biotechnologies Inc公司是一家專業(yè)開發(fā)生產(chǎn)用于研究哮喘以及其他過敏性疾病的免疫診斷和相關(guān)生物學(xué)檢測(cè)產(chǎn)品的生物技術(shù)公司，IB由兩家子公司組成，一家是位于美國弗吉尼亞的INDOOR Biotechnologies Inc. (IBI)，另一家為位于英國INDOOR Biotechnologies Limited (IBL)。IB的創(chuàng)始人Martin D. Chapman博士曾經(jīng)是美國弗吉尼亞大學(xué)的醫(yī)學(xué)和微生物教授，并曾經(jīng)擔(dān)任過美國NIH、環(huán)保署已及多家生物公司的顧問科學(xué)家。做為環(huán)境過敏原（變應(yīng)原）檢測(cè)系統(tǒng)的領(lǐng)導(dǎo)公司，IB生產(chǎn)的一系列過敏原研究和檢測(cè)用抗體擁有來自美國弗吉尼亞大學(xué)的*，能夠用于檢測(cè)屋塵螨、貓、狗、蟑螂和真菌來源過敏原。 IB開發(fā)生產(chǎn)面向?qū)嶒?yàn)室用戶的過敏原Elisa檢測(cè)試劑盒以及面向家庭用戶的過敏原快速檢測(cè)試劑盒，利用后者用戶在家中即可于10分鐘之內(nèi)檢測(cè)出屋塵螨抗原。這些檢測(cè)系統(tǒng)可用于對(duì)過敏原環(huán)境暴露水平的評(píng)估，也能讓用戶對(duì)使用的過敏原隔離清除程序、相關(guān)產(chǎn)品和設(shè)備的有效性進(jìn)行可靠的評(píng)估，還可應(yīng)用于過敏原標(biāo)準(zhǔn)化以及相關(guān)產(chǎn)品的研究開發(fā) 上海起發(fā)作為其中國授權(quán)代理長期為中國科研客戶帶來產(chǎn)品，以下是INDOOR Biotechnologies Inc產(chǎn)品一些問題的解答

一、MARIA^TM 試劑盒

Indoor Biotechnologies研發(fā)出一種針對(duì)Indoor過敏原（MARIA^TM）的多重芯片，可以在一次檢測(cè)中同時(shí)測(cè)試8個(gè)zui重要的Indoor過敏原。芯片同時(shí)檢測(cè)Der p 1, Der f 1, Mite Group 2, Fel d 1, Can f 1, Rat n 1, Mus m 1 和 Bla g 2。MARIA^TM可以提升高通量系統(tǒng)的實(shí)驗(yàn)分析能力（靈敏度，度和精密度增加），并可以節(jié)省時(shí)間和成本。

MARIA^TM技術(shù)與Radix Biosolutions和Luminex Corporation合作研發(fā)，并受到小企業(yè)創(chuàng)新研究所（SBIR）從國家環(huán)境健康科學(xué)研究（NIEHS）所得到的合同支持。結(jié)合了Indoor對(duì)過敏原特異的單抗生物技術(shù)產(chǎn)權(quán)與LuminexxMAP技術(shù)的力量，表現(xiàn)了過敏原檢測(cè)的工藝水平。

MARIA^TM的性能與實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部的重復(fù)性已經(jīng)在多通道研究，包括來自美國和歐洲的9個(gè)實(shí)驗(yàn)室中被證實(shí)了。研究對(duì)比了32,000個(gè)過敏原的檢查結(jié)果，表明MARIA在不同實(shí)驗(yàn)室的重復(fù)性都很好。近期的Indoor的數(shù)據(jù)發(fā)表在EAACI 2010上，在一個(gè)ISO17025依從的分析實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果表明MARIA的結(jié)果具有可重復(fù)性，

具體產(chǎn)品：

Premixed 5-plex Multiplex Array for Indoor Allergens (MRA-P5)

描述：

這個(gè)試劑盒可以分析Der p 1,Der f 1, Der p 2, Fel d 1和Can f 1。這是一個(gè)多通量分析試劑盒，由INDOOR Biotechnologies生產(chǎn)?？梢酝瑫r(shí)定量測(cè)定5個(gè)常見的Indoor過敏原：房屋灰塵螨Der p1（屋塵螨），Der f 1（粉塵螨），和螨2型及動(dòng)物過敏原Fel d 1（貓，貓屬）和Can f 1（狗，狗屬）

這個(gè)試劑盒可以用于分析環(huán)境樣品中的上述indoor過敏原，如房屋灰塵螨，或空氣過濾器樣本和其他生物學(xué)或環(huán)境學(xué)樣本。

remixed 5-plex Multiplex Array for Indoor Allergens (MRA-P5B)

描述：

這個(gè)試劑盒可以用于分析Der p 1，Der f 1，Fel d 1，Can f 1和 Bla g 2。這是一個(gè)多通量分析試劑盒，由INDOOR Biotechnologies生產(chǎn)?？梢酝瑫r(shí)定量測(cè)定5個(gè)常見的Indoor過敏原：房屋灰塵螨Der p1（屋塵螨），Der f 1（粉塵螨），及動(dòng)物過敏原Fel d 1（貓，貓屬），Can f 1（狗，狗屬）和Bla g 2（德國小蠊）

這個(gè)試劑盒可以用于分析環(huán)境樣品中的上述indoor過敏原，如房屋灰塵螨，或空氣過濾器樣本和其他生物學(xué)或環(huán)境學(xué)樣本。

Premixed 8-plex Multiplex Array for Indoor Allergens (MRA-P8)

描述：

這個(gè)試劑盒可以用于分析Der p 1,Der f 1, Der p 2, Fel d 1, Can f 1, Bla g 2, Rat n 1 和 Mus m 1。

這是一個(gè)多通量分析試劑盒，由INDOOR Biotechnologies生產(chǎn)?？梢酝瑫r(shí)定量測(cè)定8個(gè)常見的Indoor過敏原：房屋灰塵螨Der p1（屋塵螨），Der f 1（粉塵螨），和螨2型及動(dòng)物過敏原Fel d 1（貓，貓屬），Can f 1（狗，狗屬），Mus m 1 (小鼠), Rat n 1 (大鼠)和德國蟑螂，Bla g 2 (德國小蠊)。

這個(gè)試劑盒可以用于分析環(huán)境樣品中的上述indoor過敏原，如房屋灰塵螨，或空氣過濾器樣本和其他生物學(xué)或環(huán)境學(xué)樣本。

二、ELISA試劑盒

Indoor生產(chǎn)定量檢測(cè)ELISA試劑盒范圍廣泛，包裹來源于灰塵滿，貓，狗，小鼠，大鼠，德國蟑螂，花粉和霉的過敏原，并且在超過200篇的科學(xué)論著中都有提到這些試劑盒。

每個(gè)試劑盒包含：

l 單克隆捕獲抗體

l 校準(zhǔn)過的過敏原標(biāo)準(zhǔn)品

l 校準(zhǔn)過的生物素化的第二單抗（或兔來源的多克隆抗體）

l 10份（ELISA-10）或20份（ELISA-20）96孔板分析的足量試劑

l 完整的實(shí)驗(yàn)操作步驟和參考資料

應(yīng)用：

l 在環(huán)境和生物樣品中檢測(cè)過敏原水平

l 家庭過敏原檢測(cè)和監(jiān)測(cè)，避免一些繁瑣的操作

l 過敏原操作規(guī)程和設(shè)備控制的售前檢測(cè)

l 過敏原標(biāo)準(zhǔn)化

l 過敏原產(chǎn)品，診斷和疫苗的組份

產(chǎn)品列表：

Ø House Dust Mite房屋灰塵螨

Ø 檢測(cè)Animal動(dòng)物過敏原 檢測(cè)

Ø Cockroach蟑螂過敏原 檢測(cè)

Ø Mold霉菌過敏原 檢測(cè)

Ø Pollen花粉過敏原 檢測(cè)

Ø FITkit® for Latex Allergens膠乳過敏原檢測(cè)FIT試劑盒

三、Purified Allergens 純化的過敏原

 INDOOR有超過50種的天然或重組的過敏原來滿足您的研究需要。過敏原通過親和層析或者和HPLC的方法純化，他們的活性通過檢測(cè)單克隆抗體結(jié)合和IgE抗體結(jié)合（重組IgE ELISA）來確定。

應(yīng)用：

l T細(xì)胞功能和抗原遞呈的體外研究

l IgE反應(yīng)&哮喘的動(dòng)物模型

l 天然免疫

l 抗體檢測(cè)，組胺釋放實(shí)驗(yàn)

l 結(jié)構(gòu)學(xué)研究和生物實(shí)驗(yàn)

厭倦處理內(nèi)毒素？請(qǐng)使用LoTox^TM--- 純化的過敏原
Tired of dealing with endotoxin?  Use LoTox™ – Purified Allergens

我們向可能存在內(nèi)毒素干擾細(xì)胞反應(yīng)任何實(shí)驗(yàn)研究者推薦LoTox^TM產(chǎn)品。LoTox^TM過敏原的內(nèi)毒素水平都很低（<0.03EU/µg蛋白），是應(yīng)用于T細(xì)胞，APC和樹突狀細(xì)胞人類和鼠類細(xì)胞研究的理想產(chǎn)品。

產(chǎn)品列表:

Ø LoTox™ Purified Allergens LoToxTM純化過敏原(15個(gè)產(chǎn)品 )

Ø Purified Natural Allergens 純化的天然過敏原(24個(gè)產(chǎn)品)

Ø Purified Recombinant Allergens 純化的重組過敏原(28個(gè)產(chǎn)品)

Ø cDNA Products cDNA產(chǎn)品

INDOOR 有Allergopharma Joachim Ganzer KG (Hamburg, Germany)的許可證協(xié)議，是*可以銷售研究用過敏原cDNA的公司。

在該許可下，INDOOR可以銷售以下cDNA’s:

灰塵螨：Der p 1, Der f 1, Der p 2, Der f 2, Der p 3, Der p 7, Der f 7
貓: Fel d 1

狗: Can f 1, Can f 2

草花粉: Phl p 1, Phl p 5, Lol p 1, Lol p 5, Cyn d 1, Sor h 1

雜草花粉: Amb a 1

過敏原cDNA可應(yīng)要求提供，目前可以提供的上面已用粗體字表示。其他我們生產(chǎn)的重組抗原cDNA請(qǐng)咨詢。

四、Antibodies 抗體

公司有為檢測(cè)房屋灰塵螨，狗，貓，蟑螂，和真菌過敏原的單克隆抗體，覆蓋范圍廣泛。

產(chǎn)品列表：

Ø Monoclonal Antibodies 單克隆抗體

Ø Mouse/Human Chimeric Antibodies鼠/人的嵌合抗體

l Mouse anti-Der p 2/human IgE (2B12-IgE)

鼠類抗Der p 1單抗的輕鏈與一個(gè)VH結(jié)構(gòu)域與人IgE的重鏈可變（VH）結(jié)構(gòu)域在雜交瘤細(xì)胞中共表達(dá)，收集細(xì)胞培養(yǎng)液上清。

l Mouse anti-Der p 2/human IgG1 (2B12-IgG1)

在雙氯金霉素反應(yīng)器中生產(chǎn)。通過IgG親和層析純化。

l Mouse anti-Der p 2/human IgG4 (2B12-IgG4)

在雙氯金霉素反應(yīng)器中生產(chǎn)。通過IgG親和層析純化。

Ø Biotinylated Monoclonal Antibodies生物素標(biāo)記的單克隆抗體

Ø Polyclonal Antibodies多克隆抗體

五、Allergen Standards 過敏原標(biāo)準(zhǔn)品

定義明確的過敏原對(duì)于免疫實(shí)驗(yàn)的校準(zhǔn)是很關(guān)鍵的。Indoor生產(chǎn)的通用過敏原標(biāo)準(zhǔn)品（UAS）包含8個(gè)純化的過敏原，是按照歐洲聯(lián)合CREATE項(xiàng)目原則要求制造的。UAS的過敏原通過氨基酸分析確認(rèn)，并且標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)ELISA和MARIA均適用。

用于其他ELISA試劑盒的過敏原標(biāo)準(zhǔn)品在室內(nèi)生產(chǎn)并經(jīng)過校準(zhǔn)，有可能與國家或參考制劑有不同之處。

Indoor的過敏原標(biāo)準(zhǔn)品只推薦用于免疫分析校準(zhǔn)，作為對(duì)ELISA和MARIA^TM試劑盒的補(bǔ)充。這些標(biāo)準(zhǔn)品不推薦用于體外抗體檢測(cè)，T細(xì)胞研究，免疫接種或其他用途。請(qǐng)看LoTox^TM產(chǎn)品和其他純化的過敏原的綜合應(yīng)用信息。

產(chǎn)品列表：

Ø Universal Allergen Standard 通用過敏原標(biāo)準(zhǔn)品

Ø House Dust Mite 房屋灰塵螨

Ø Cockroach 蟑螂

Ø Mold霉菌

六、Rapid Test and Dust Collection 快速檢測(cè)和集塵器

Indoor研發(fā)了集塵器和取出設(shè)備，使檢測(cè)成為一個(gè)簡單，便利的過程。我們的產(chǎn)品DUSTREAM^TM集塵器為我們的環(huán)境檢測(cè)和Indoor®過敏原檢測(cè)服務(wù)提供了*的樣品。

DUSTREAM^TM是一個(gè)我們檢測(cè)灰塵螨的Ventia™快速過敏原檢測(cè)整體組分，消費(fèi)者用快速檢測(cè)試劑盒可以在家中用10分鐘完成灰塵螨的檢測(cè)。Ventia^TM有大包裝，可作為室內(nèi)空氣質(zhì)量，工業(yè)衛(wèi)生，職業(yè)衛(wèi)生等行業(yè)專業(yè)人士的IAQ-PAK。

產(chǎn)品列表:

Ø Ventia™ Rapid Allergen Test VentiaTM過敏原快速檢測(cè)

Ø DUSTREAM™ Collector 灰塵收集器

Ø Mitest Collector 螨收集器

FAQ：

過敏原：

Q1 過敏原應(yīng)該怎樣保存？

A 過敏原應(yīng)該在-20℃冷凍保存。

Q2  過敏原是怎樣純化的?

A 不同的過敏原純化的步驟是不同的。我們通過親和層析，離子交換，疏水性相互作用，用疏水性相互作用聯(lián)合尺寸排除色譜法純化天然的，重組的及LoToX^TM過敏原。

Q3: 提供的抗原是在什么緩沖體系中？

A天然和重組的抗原是在無防腐劑和無載體的磷酸鹽緩沖液中的，pH 7.4，無菌。 LoTox™抗原是在有防腐劑，無載體，無內(nèi)對(duì)手，無菌的磷酸鹽緩沖液中的，pH 7.4.。

Q4 LoTox™ 過敏原是什么?

A LoTox™過敏原內(nèi)毒素水平很低，低于0.03 EU/µg 蛋白，是用T細(xì)胞，APC細(xì)胞，樹突狀細(xì)胞做人類和鼠細(xì)胞研究的理想過敏原。

 Q5 我的T細(xì)胞研究為什么要用 LoTox™ 產(chǎn)品?

A LoTox™ 產(chǎn)品是理想的是因?yàn)樗鼛缀醪缓瑑?nèi)毒素并且可以避免有內(nèi)毒素引起的T細(xì)胞反應(yīng)。

Q6 為什么要用純化的過敏原，而不是過敏原提取物?

A 過敏原提取物是非均質(zhì)的，包含非過敏原的蛋白和其他大分子。研究者經(jīng)常用提取物是因?yàn)樗麄冃枰?/span>T細(xì)胞應(yīng)答，但這些信號(hào)的判讀是不可靠的。應(yīng)答的特異性不能被確認(rèn)，很有可能這個(gè)應(yīng)答是由非過敏原蛋白引起的，如IgE和IgG抗體應(yīng)答，組胺釋放實(shí)驗(yàn)和動(dòng)物模型。我們強(qiáng)烈推薦在內(nèi)毒素可能干擾細(xì)胞應(yīng)答的任何細(xì)胞研究中使用LoTox™ 產(chǎn)品。

Q7我應(yīng)該如何選擇天然或重組過敏原？

 A 重組過敏原與其天然的過敏原結(jié)構(gòu)非常近似，與IgE抗體結(jié)合的實(shí)驗(yàn)結(jié)果也非常近似。畢赤酵母表達(dá)的重組蛋白組成糖分過多可能會(huì)干擾與IgE的結(jié)合。我們提供的重組過敏原LoTox™ Fel d 1 (LTR-FD1D), rBla g 2 (RP-BG2) 和 rDer p1 (RP-DP1D)是去糖基化的產(chǎn)品。 

Q8 我如何激活Der p 1的半胱氨酸蛋白酶活性?

 A Der p 1 由 5 mM半胱氨酸或1mM二硫蘇糖醇激活而再生巰基，使其在純化中氧化。(Gough et al. Journal of Experimental Medicine, 1999).

Q9 我應(yīng)用何種底物來檢測(cè) Der p 1的半胱氨酸蛋白酶活性?

A DTT依賴的半胱氨酸蛋白酶活性可以在熒光實(shí)驗(yàn)中通過熒光肽底物Boc-QAR-MCA來檢測(cè)。

Q10我需要激活 Der p 絲氨酸蛋白酶活性嗎?

 A 不需要，Der p絲氨酸蛋白酶(NA-DPSP)不需要被激活。 

Q11 我應(yīng)該用哪種底物來測(cè)試Der p絲氨酸蛋白酶的活性?

 A DTT依賴的絲氨酸蛋白酶活性可以在熒光實(shí)驗(yàn)中通過熒光肽底物Boc-QGR-MCA來檢測(cè)。

MARIA™

 Q1 MARIA™ 試劑盒是冷凍保存還是在室溫下保存?

 A 都不是，試劑盒和所有的試劑都應(yīng)保存在4℃冰箱中，這是很關(guān)鍵的。冷凍會(huì)破壞試劑。N

Q2 MARIA™ kit的有效期是多久?

 A 假如保存得當(dāng)?shù)脑?，試劑盒在收到后?/span>6個(gè)月內(nèi)都說是有保障的。

Q3在實(shí)驗(yàn)前有沒有必要將樣品離心？

A 是的，MARIA™ 是基于微粒的實(shí)驗(yàn)，所以將樣品中異質(zhì)的顆粒減少到zui小是很重要的。

Q4 你們推薦的樣品稀釋比例是多少?

 A 推薦的樣品稀釋比例取決于您樣品的類型及您研究所需達(dá)到的靈敏度。對(duì)于房屋灰塵提取物來說，我們推薦將樣品以 1/10, 1/100 和1/10,000稀釋，這將使您達(dá)到較低的檢測(cè)限0.1-0.9ng/ml(相當(dāng)于0.002-0.012µg/g灰塵)。

如果您不需要這么高的靈敏度，只需將樣本用1/100和10,000稀釋，靈敏度水平就為1-6ng/ml (灰塵0.02-0.12µg/g)。這樣您每塊板子可以檢測(cè)35個(gè)樣品。

 空氣過濾器提取物中的過敏原濃度要更低些，分析這類樣本，我們通常不稀釋，或以1/10和1/50稀釋。

Q5 我應(yīng)該如何進(jìn)行系列梯度稀釋?

 A1對(duì)于系列稀釋1/10, 1/100 和 1/10,000:

每個(gè)樣品準(zhǔn)備三個(gè)微量離心管，管1作1/10稀釋，將10µL樣品加入到90µL實(shí)驗(yàn)緩沖液中，管2中加入90µL實(shí)驗(yàn)緩沖液，再加入管1（1/10稀釋）中的10µL液體，渦旋振蕩混勻。管3中加入990µL實(shí)驗(yàn)緩沖液，再加入管2（1/100稀釋）中的10µL液體，渦旋振蕩混勻。50µL of each prepared dilution are used in the MARIA™ 實(shí)驗(yàn)中每種稀釋比例用50µL 。

A2 對(duì)于系列稀釋1/10和1/50:

 每個(gè)樣品準(zhǔn)備兩個(gè)微量離心管:管1中加入90µL實(shí)驗(yàn)緩沖液，再加10µL 未稀釋樣品，渦旋振蕩混勻。管2中加入80µL實(shí)驗(yàn)緩沖液及20µL管1中稀釋過的樣品，渦旋振蕩混勻。

Q6實(shí)驗(yàn)緩沖液必須要滅菌嗎?

 A 是的！Yes! 未滅菌的實(shí)驗(yàn)緩沖液有較高的顆粒負(fù)荷，這會(huì)干擾xMAP系統(tǒng)的檢測(cè)。它會(huì)導(dǎo)致高微粒聚集比率，讀板時(shí)間可能會(huì)增加3-4倍。

Q7 ELISA洗板機(jī)可以用于MARIA™ 實(shí)驗(yàn)嗎?

A 不可以。翻轉(zhuǎn)板子或重新板中的孔會(huì)洗掉微球。所有的洗脫步驟都需要通過多頭抽真空裝置來過濾，試劑盒中有提供濾板。

Q8 在孵育過程中我需要搖動(dòng)板子嗎?

 A 不需要。在每步孵育前，微粒和事件要通過劇烈吹打使微粒和試劑充分混勻。不需要在孵育過程中晃動(dòng)。

Q9 在暗室孵育的重要性是什么？我可以將板子放在工作臺(tái)上嗎?

A 所有的孵育必須在暗室中進(jìn)行，否則微球會(huì)喪失其可被熒光辨別的標(biāo)記。

Q10在孵育過程中我需要用鋁箔紙封住板子嗎?

 A 我們通常用配套的蓋住封住板子，孵育時(shí)將其放在空的抽屜中。

Q11 我要用什么儀器讀板?

 A 試劑盒只能與Luminex公司基于激光的熒光分析檢測(cè)儀相配對(duì)：Luminex® 100, Luminex 200 和其他來自Luminex公司儀器或授權(quán)的經(jīng)銷商包括Bio-Rad 實(shí)驗(yàn)室(赫拉克勒斯, CA )、Qiagen 公司 (巴倫比亞, CA) and MiraiBio (南舊金山, CA))的Luminex儀器。我們使用Bio-Plex 儀器及其Bio-Plex管理軟件(Bio-Rad, Hercules, CA).

 Q12 檢測(cè)每個(gè)分析需要使用多少微粒？

A我們推薦每個(gè)分析物用100個(gè)微粒以求的重復(fù)性。

Q13 我應(yīng)選擇怎樣的擬合曲線?

 A我們使用5個(gè)參數(shù)的logistic (5PL)曲線擬合。(該擬合曲線可以很容易的在Bio-Plex 管理軟件中找到)

 Q14我應(yīng)該怎樣決定標(biāo)準(zhǔn)曲線中可用的部分?

 A1 如果曲線底端的熒光強(qiáng)度（FI）接近空白對(duì)照的FI，則不要使用在空白對(duì)照的FI加減3個(gè)空白對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)差之內(nèi)的FI。

A2 我們通常不使用在曲線頂部平直部分內(nèi)FI的數(shù)據(jù)。這意味著我們通常排除Der p 1, Der f 1, Der p 2, Fel d 1, Can f 1, Rat n 1 和Mus m 1測(cè)得曲線頂部的2-3個(gè)點(diǎn)。Bla g 2 曲線的頂部是可用，然而底部的3-4個(gè)點(diǎn)就太接近空白對(duì)照數(shù)據(jù)了（看上）。

A3一些軟件包，如Bio-Plex Manager® (Bio-Rad, Hercules, CA) 會(huì)在輸出的Excel文檔中自動(dòng)顯示期望值與實(shí)測(cè)標(biāo)準(zhǔn)值。我們使用這個(gè)功能作為額外的質(zhì)量控制和*使用值，并且實(shí)測(cè)值和期望值的比率在15%之內(nèi)。

A4 變異率（CV%）應(yīng)在兩個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差之間沒有超過15%。如果不是這樣，您的移液器和移液過程的準(zhǔn)確性需要被檢測(cè)。

Q15用不同的樣品稀釋倍數(shù)我得到了不同的結(jié)果，我應(yīng)該怎樣選擇正確的結(jié)果?

 A 從不同的樣品稀釋倍數(shù)獲得不同的結(jié)果，這是取決于您樣品中過敏原的濃度。有很多標(biāo)準(zhǔn)供您選擇正確的結(jié)果。

只選擇落入可用MFI范圍的結(jié)果。如果多于一倍的稀釋倍數(shù)得到相似的結(jié)果：取平均結(jié)果。除去Der f 1 外的所有分析物：如果稀釋倍數(shù)增高而結(jié)果升高：選擇基于zui高稀釋倍數(shù)，含有很少Der f 1的樣品與特定的灰塵提取物中底物出現(xiàn)低水平的干擾，并通過高稀釋倍數(shù)的計(jì)算而增大。如果您觀察到這樣的結(jié)果如1/10= 7ng/ml, 1/100=74ng/ml, 1/10,000=4500ng/ml，那么就會(huì)出現(xiàn)上面所說的效應(yīng)。在這種情況下，使用1/10稀釋得到的結(jié)果，除非這個(gè)結(jié)果達(dá)到~100ng/ml ，若是這個(gè)點(diǎn)，則您可以信賴更高稀釋倍數(shù)所得到的結(jié)果。這種異?，F(xiàn)象在我們所檢測(cè)樣本中的比率<5%，并且只出現(xiàn)在Der f 1低水平的樣本中。

 Q16 我可以獲得 MARIA™ 技術(shù)的培訓(xùn)嗎?
A可以的，我們?cè)诿绹S吉尼亞州夏洛特維爾的公司中安排了一年兩次的培訓(xùn)課程，請(qǐng)查詢我們的以獲得更多的信息。我們同樣提供基于一年的循環(huán)MARIA™客戶培訓(xùn)

ELISA

Q1 Der p 1 ELISA 試劑盒 EL-DP1和EL-DP1A的區(qū)別是什么?

 A INDOOR 推出的兩個(gè)檢測(cè)Der p 1 的ELISA試劑盒，實(shí)驗(yàn)中與之結(jié)合的單抗是不同的。

EL-DP1:捕獲單抗為5H8 ，生物素標(biāo)記的單抗為4C1

EL-DP1A: 捕獲單抗為10B9，生物素標(biāo)記的單抗為5H8

 zui廣泛使用的ELISA試劑盒為EL-DP1 (5H8/4C1)生物素4C1單抗在Der f 1 ELISA (EL-DF1)試劑盒中也有使用. EL-DP1推薦用于大多數(shù)常規(guī)灰塵和空氣樣本檢測(cè)Der p 1。然而在EL-DP1實(shí)驗(yàn)中一定程度上存在與Der f 1的交叉反應(yīng)，約為2% (參見 Luczynska et al, J Immunol Meth, 1989)。在常規(guī)分析中，這種水平的交叉反應(yīng)不顯著。

EL-DP1A試劑盒與Der f1的交叉反應(yīng)<0.1% ，可應(yīng)用于區(qū)分Der p 1 和Der f 1。舉例來說，過敏原生產(chǎn)商用于確定他們灰塵螨培養(yǎng)的樣本沒有交叉污染。EL-DP1A分析與EL-DP1試劑盒的敏感性水平相同(1-2ng/ml)。

 Q2我們注意到實(shí)驗(yàn)顯影非常慢(并且從未打到過 OD 2.0). 這有問題嗎？

A 您的結(jié)果明顯存在問題?？刂魄€在zui高濃度的讀值應(yīng)在OD 2.0-2.4 ，敏感度應(yīng)下至1-4ng/ml。如果您所有的實(shí)驗(yàn)，OD值都沒有達(dá)到2.0 ，那么您實(shí)驗(yàn)的底物和顯色方面可能存在問題。

A 在儲(chǔ)存中所有生物素化的試劑是不是一直處于冷凍狀態(tài)？這會(huì)減小這些單抗的敏感性

A 您是否混用了試劑或使用緩沖液片劑？我們發(fā)現(xiàn)一些緩沖液片劑不如新鮮制備的溶液有用。所有溶液通常在4℃保存不超過1個(gè)月，并不使用硫柳汞。

A 是否有試劑使用過*作為防腐？這會(huì)阻止顯色，因?yàn)?是過氧化物酶的抑制劑。

 A 在為ABTS配置溶液B時(shí)，使用的磷酸鈉形式是否正確？磷酸鈉必須是二元的，即Na₂HPO4·7H₂0 

A ABST溶液中是否加了足量的*？每毫升ABST溶液中要加入1µl 30% H2O2。

A鏈霉菌抗生物素蛋白-素過氧化物酶是否被正確稀釋了？

A檸檬酸鹽緩沖液的pH值是否正確? ABTS溶液的pH值應(yīng)為4.2，并在調(diào)節(jié)前就應(yīng)靠近這個(gè)pH。如果偏離較遠(yuǎn)，溶液A或溶液B或他們的組成就可能是錯(cuò)的。

A 洗板機(jī)污染有時(shí)可能會(huì)妨礙顯色，導(dǎo)致顯色非常緩慢，或達(dá)不到OD 2.0.洗板機(jī)應(yīng)當(dāng)定期清潔。

A直接通過窗戶外的日光曝光會(huì)導(dǎo)致上述問題，孵育時(shí)讓板子遠(yuǎn)離窗戶。

Q3 我們實(shí)驗(yàn)的背景值很高，這是什么原因引起的?

A 通常當(dāng)二抗是兔的多克隆抗體時(shí)，實(shí)驗(yàn)的背景較高。背景值通常在0.15OD左右。其他引起高背景的原因可能是：

A過氧化物酶標(biāo)記的羊抗兔IgG抗體的來源問題。我們使用的為Biosource International和Jackson實(shí)驗(yàn)室產(chǎn)品。這兩個(gè)抗體的實(shí)驗(yàn)背景都非常低，BioSource為: 1- (貨號(hào) # ALI4404) Jackson實(shí)驗(yàn)室為: 1- (貨號(hào) # 111-036-045)。

A ABST底物在4°C能保持多久? 在冰箱中通常一個(gè)月內(nèi)可以保持穩(wěn)定。如果保存更長的時(shí)間試劑可能會(huì)變綠，并且出現(xiàn)高背景。ABST溶液在實(shí)驗(yàn)中應(yīng)該差不多是無色的。其他溶液也應(yīng)如此。所有溶液在4°C保存時(shí)間通常不超過1個(gè)月，并不含硫柳汞。

A 在加入過敏原溶液之前用1%BSA/PBS-T封閉板子30分鐘。

A在某些情況下，出現(xiàn)高背景或在系列稀釋時(shí)，zui初的幾個(gè)樣本稀釋得太低或檢測(cè)不到，卻出現(xiàn)隨機(jī)樣本檢測(cè)值高，可能是由于洗板機(jī)的污染。洗板機(jī)應(yīng)當(dāng)定期清洗預(yù)防一些隨即孔污染和堵塞。

A 如果手動(dòng)洗板，實(shí)驗(yàn)時(shí)增加清洗的次數(shù)會(huì)有助于降低背景。將各孔*填滿不要溢出，然后小心的將板傾倒不要污染。然后在紙巾上溫和的輕敲以去除剩余緩沖液。

Q4 我們重復(fù)的標(biāo)準(zhǔn)曲線和/或樣品測(cè)試結(jié)果有很高的CV值，這是什么原因?

A 加入ABST后，讀數(shù)確認(rèn)顯色值之前，要自始至終時(shí)常通過輕打板子兩側(cè)來溫和搖晃。

A在進(jìn)行ELISA實(shí)驗(yàn)室洗液是非常重要的。確認(rèn)移液器特別是多孔道的在整塊板倍比稀釋時(shí)每個(gè)孔吸取和排出的量都一樣。并且確認(rèn)在移液時(shí)沒有氣泡。

Q5 我們可以保存微孔中包被的抗體嗎？他們能被保存多久，我們應(yīng)該怎樣保存？

 A包被過的板子只能保存很短的一段時(shí)間，如一個(gè)周末，或長至1周。我們通常將用抗體溶液包被的板子用塑料薄膜抱住放入實(shí)驗(yàn)室冰箱中或冷室中。我們未嘗試過更長的保存時(shí)間。

Q6 我們可以用OPD貨TMB來代替ABST嗎，按照Sigma的要求（放在干燥器中，含氬）保存ABST有些困難。

A 您可以用OPD或TMB。我們不將ABST保存在氬中（這個(gè)不是很必要），同樣得到了好的結(jié)果。

Q7 灰塵樣本應(yīng)該保存在 4°C嗎，或是要冷凍？

 A 實(shí)驗(yàn)前我們通常將房屋灰塵樣本保存在4°C，但一定提取過后應(yīng)保存在-20°C。

Q8在ELISA中我如何終止酶反應(yīng)?

 A終止反應(yīng)可以在每個(gè)孔內(nèi)加入0.1ml 0.002M *。大部分ELISA讀板機(jī)掃描板子的時(shí)間在5-20秒內(nèi)，若未終止反應(yīng)，OD值應(yīng)達(dá)到。如果有大量的板子（5-10個(gè)板子）需要處理，或因其他原因如拍照需要保存時(shí)，可以加入疊氮化合物。

Q9 ELISA孵育的溫度是多少?

 A用捕獲抗體包被ELISA板的溫度為4°C一晚.其他所有步驟都在室溫下進(jìn)行，通常為20-25°C。

 Q10 一個(gè)ELISA試劑盒可以分析多少灰塵或空氣樣本？你們推薦分享多少？

A Indoor的ELISA試劑盒對(duì)10份或20份的96孔板來說包含足夠的試劑(捕獲mAb, 生物素化的檢測(cè)mAb，的過敏原標(biāo)準(zhǔn)品)，每塊板子可以分析的樣品數(shù)量取決于每個(gè)樣本的稀釋數(shù)量  

A 重復(fù)的標(biāo)準(zhǔn)曲線需要4個(gè)對(duì)照孔(PBS-T)，占用24個(gè)孔，每個(gè)板剩余的72個(gè)孔檢測(cè)樣本。一般每個(gè)灰塵樣本我們倍比稀釋4個(gè)（螨過敏原1/10, 1/20, 1/40, 1/80），這意味著每塊板可以檢測(cè)18個(gè)樣本。在這樣的條件下一個(gè)20塊板的ELISA試劑盒可以分析18 x 20 = 360個(gè)樣本。

每個(gè)樣本我們稀釋四種，這樣在大多數(shù)情況下，在一個(gè)單一實(shí)驗(yàn)中我們可以達(dá)到就>90%的檢測(cè)結(jié)果。四個(gè)稀釋度會(huì)增加每個(gè)樣本控制曲線線性部分至少有兩個(gè)點(diǎn)的可能性。，果樣本已知過敏原水平范圍，也可以用較少的稀釋梯度。其他樣本，如過敏原提取物，可能含有非常高的過敏原水平，那么在倍比稀釋時(shí)，需要增加稀釋的倍數(shù)，從1/100 或 1/1000開始,并可能需要在整個(gè)ELISA板上作梯度稀釋。

空氣樣本通常過敏原水平較低，實(shí)驗(yàn)時(shí)可以以1/2, 1/4, 1/8, 和1/16來稀釋。

Q補(bǔ)充為什么沒有單獨(dú)檢測(cè)Der p 2的ELISA試劑盒呢？

A由于Der p 2和Der f 2為相同抗原表位，所以使用的檢測(cè)抗體無法區(qū)分這兩種物質(zhì)。我們有試劑盒EL-D2就是檢測(cè)Der p 2和Der f 2過敏原的

Environmental Testing

 Q1我想給Indoor郵寄一些樣本做過敏原分析，你們需要多少量?

A 分析大量灰塵樣本的過敏原水平，我們需要100mg的灰塵。我們近期的研究發(fā)現(xiàn)由于差異的可能性增加，除非至少有10mg的灰塵樣品可用否則不能做過敏原分析。少于10mg可用灰塵不能做分析，會(huì)被郵寄退回（NES-不足量樣本）

"Variability introduced into allergen immunoassays during the dust extraction process" 

A 如果用DUSTREAM™ 并在推薦的地區(qū)和時(shí)間采樣也只有很少或沒有灰塵，那么持續(xù)采樣直到濾器達(dá)到1/4滿。我們的過敏原結(jié)果不是基于地區(qū)的，而是基于每克灰塵中有多少微克過敏原。

 A對(duì)于過敏原提取物，或大量灰塵、空氣過濾器中的的過敏原提取物，我們需要zui少0.5ml，特別是當(dāng)要檢測(cè)多個(gè)過敏原時(shí)。

A 對(duì)于空氣采樣錄音帶，整個(gè)過濾器要用1mlPBS提取溶液來提取，每個(gè)過濾器的結(jié)果據(jù)報(bào)道為ng或µg 級(jí)。

 Q2我想給Indoor郵寄一些樣本做內(nèi)毒素分析，你們需要多少量

 A分析大量灰塵樣本的內(nèi)毒素水平，我們需要100mg的灰塵。如果少于20mg灰塵是無法做大量灰塵的分析的。如果用DUSTREAM™ 并在推薦的地區(qū)和時(shí)間采樣也只有很少或沒有灰塵，那么持續(xù)采樣直到濾器達(dá)到1/4滿。我們的內(nèi)毒素結(jié)果不是基于地區(qū)的，而是基于每克灰塵中的內(nèi)毒素單位。

A 我們收取的樣本是要為提取過的，這點(diǎn)非常重要。提取的過程必須在一個(gè)干凈的環(huán)境中進(jìn)行，并且要用含0.05%吐溫不含內(nèi)毒素的水。樣本的提取和分析應(yīng)在同一天進(jìn)行。這些步驟對(duì)于防止其他來源的內(nèi)毒素污染非常重要。

A 空氣過濾器樣品也可郵來做內(nèi)毒素分析。整個(gè)過濾器在1ml無內(nèi)毒素含0.05%吐溫的水中提取。結(jié)果報(bào)告形式為每個(gè)過濾器中含有多少內(nèi)毒素單位。我們推薦同時(shí)郵寄一個(gè)空的過濾器檢測(cè)作為使用后過濾器的基準(zhǔn)。

Q3我在我的實(shí)驗(yàn)室中準(zhǔn)備要分析的灰塵樣本，我需要過濾這些灰塵嗎？

A 是否過濾灰塵是由該灰塵的質(zhì)量決定的。我們通常不過濾從床上和柔軟的家具上收集的灰塵。地毯樣本過濾（如用No.45，直徑355um的篩子過濾）來分離纖維和灰塵中的大顆粒。我們推薦用DUSTREAM™收集器，可以大大減少過濾灰塵的需要。用DUSTREAM™收集器收集灰塵樣本后，拆下含有灰塵樣本的尼龍濾器，倒置濾器，輕拍，是灰塵落入一張稱過重的紙上，灰塵會(huì)比纖維先從過濾器中出來。

Q4 灰塵樣本和其提取物應(yīng)該怎樣保存？

A灰塵樣本提取前應(yīng)在室溫下，保存在干燥的地方?；覊m提取物應(yīng)在-20℃冰箱中冷凍保存。

Q5INDOOR分析服務(wù)的采樣和委托程序是怎樣的？

A 請(qǐng)看Collecting Dust Samples和Submitting Samples.

A Download Analysis Request Form 

Q6你推薦用什么方法準(zhǔn)備過敏原分析的灰塵提取物 ?

 A請(qǐng)看Sample Extraction Procedure.

 A用于內(nèi)毒素實(shí)驗(yàn)的提取物需要在Indoor分析服務(wù)實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行，同天進(jìn)行分析，以防內(nèi)毒素污染等多重風(fēng)險(xiǎn)。這項(xiàng)服務(wù)不應(yīng)郵寄提取物，只要干的樣本如大量灰塵和空氣過濾器。

 
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